722關(guān)于分光光度計基線校正的原理和方法

關(guān)鍵詞：雙光束紫外分光光度計；基線校正；美析儀器；UV-1800PC;UV-1900PC

對于雙光束分光光度計而言在使用前必須要做基線校正（也稱為基線記憶）， 對于此項工作的原理和操作方法許多使用者的認識不盡相同；為此談?wù)勎覀兊恼J識。

(一）為何要做基線校正？

*，光度計的光學(xué)系統(tǒng)基本是由光源（氘燈、鎢燈）一單色器（光柵、狹 縫）一檢測器（光敏二極管、光電倍增管）等三部分組成的。在我們使用的波長區(qū)域中（一般紫外可見儀器均在190nm?1100nm范圍里，）上述部件在不同的波長下的響應(yīng)值（光源的發(fā)射強度、單色器的色散強度、檢測器的放大倍數(shù)）均不相同；通俗地說、即使沒有樣品，儀器如果不做基線校正，那么在190nm至 1100nm的范圍中，吸光值或透過率不會是一條直線，這是一種客觀的物理現(xiàn)象。

(二）被校正的基線種類和用途

(1)系統(tǒng)基線：

所謂系統(tǒng)基線就是儀器固有的波長范圍的總基線；例如一臺儀器出廠設(shè)計的波長全程范圍是190nm至1100nm，那么它的系統(tǒng)基線就是這個范圍。一般來講， 作為分析人員對一臺儀器做全程掃描測試是比較少見的；之所以要做系統(tǒng)基線的目的一般是將儀器的光學(xué)系統(tǒng)的響應(yīng)值校正到基本一致；這就類似馬拉松賽跑一樣，只要大家在同一起跑處（注意：不是起跑線)比賽，前后差幾米出發(fā)無所謂。

(2)用戶基線：

所謂用戶基線就是分析者自己設(shè)定的測量波長區(qū)域的一段基線；由于這是分析所需要的區(qū)域，為了保證測試的準確性，故用戶基線的校正是非常重要和必要的； 這就類似百米賽跑一樣，運動員要在同一個起跑線上比賽而不能搶跑，否則無法準確計算成績。

(三）基線校正的方法

(1)   系統(tǒng)基線：

系統(tǒng)基線的校正較為簡單，一般情況下樣品室內(nèi)不放樣品，僅做光學(xué)系統(tǒng)的校正; 如果一定要使用全波段的測量那另當別論。同時需要注意的是：系統(tǒng)基線無需經(jīng) 常校正，一般半個月或一個月校正校正一次即可。對有的儀器來說，系統(tǒng)基線校正過于頻繁反而會造成基線漂移嚴重。

(2)   用戶基線校正：

正確的校正方法是：兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中，校正波長范圍要大于分析波長范圍；例如、分析設(shè)定范圍為220nm?500nm，那么校正波長就要設(shè)定為210nm?510nm;等待校正結(jié)束后再將波長設(shè)定回到原來的220nm?500nm范圍。這種校正方法的優(yōu)點是：如果校正波長與分析波長*吻合一致，有可能在校正后的基線兩端出現(xiàn)大的噪聲；如果校正范圍大于實際分析范圍并掐頭去尾后可以提高分析精度。我將這種校正方法起名為“豆芽菜 原理”，目的是便于記牢；（因為我們吃豆芽菜時均要掐頭去根，僅吃中間部分， 故以前的飯館將炒豆芽這道菜稱為“炒掐菜”；）。關(guān)于這種校正方法，許多使用者往往不知曉或忽略掉了。

值得注意的是，有的儀器操作者在做基線校正時，參比一側(cè)不放參比溶液，也就是用空氣來做參比對照。這種方法在可見區(qū)對有的樣品也許有時影響不大，但在紫外區(qū)影響就會很明顯了。嚴格的說，用空氣做參比所測得的結(jié)果不是真正意義上的校正光譜。

(四）基線校正的注意事項

(1)  基線校正時要保證儀器有一定的預(yù)熱時間

(2)  每更換一種參比溶液后均要重新做基線校正

(3)  如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時測試結(jié)果會出現(xiàn)負值，此時要考慮使用何種溶液做基線校正了。

做基線校正時要考慮試劑的使用波長范圍問題，因為有的試劑在某個波長以下的吸光度值會無限大，這時去做校正會超出儀器的有效量程范圍，無法得到真正的結(jié)果。關(guān)于試劑的使用波長范圍，目前一般在試劑瓶的標簽上會有標注。